LAG3人源化模型体内药效实验

LAG3人源化模型体内药效实验

LAG3(Lymphocyte activation protein 3),淋巴细胞活化蛋白3,在活化的T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞和浆细胞样树突状细胞上表达[1,2]。LAG3基因编码的膜蛋白包含四个免疫球蛋白超级家族结构域,在结构和染色体定位方面与CD4非常相似[3],但它以更高的亲和力与MHC II(主要组织相容性复合体II类分子)结合[4],并负调节T细胞的功能[5,6]。研究表明,敲除LAG3基因或体内抗体阻断LAG3功能,可使器官或肿瘤中的抗原特异的CD8+T细胞的聚集和效应功能增加[7]。因此,阻断LAG3是一种潜在的肿瘤治疗方法。

构建策略:集萃药康通过将BALB/c及C57BL/6小鼠Lag3基因编码胞外区的部分替换为相应的人源基因序列,保留了鼠Lag3基因的胞内信号转导区,成功构建了LAG3人源化小鼠模型,包括单人源化小鼠BALB/c-hLAG3及C57BL/6-hLAG3和双人源化小鼠BALB/c-hPD1/hLAG3及C57BL/6-hPD1/hLAG3。LAG3人源化小鼠模型是人LAG3抑制剂药效评价及安全性评价的理想动物模型。


1. C57BL/6-hLAG3:mPD1和hLAG3抗体药效实验

在B6-hLAG3小鼠皮下接种MC38肿瘤细胞系后测试抗人LAG3抗体肿瘤抑制药效。

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左图:小鼠肿瘤生长曲线  右图:小鼠体重变化曲线

基于B6-hLAG3小鼠皮下接种MC38模型的体内药效实验。 将结肠癌细胞MC38培养至对数生长期后接种至6-8周龄的B6-hLAG3(LAG3人源化小鼠)皮下,待肿瘤生长至平均体积约90 mm3时随机分为Vehicle(对照)组、anti-mPD1单药组、anti-hLAG3单药组、anti-mPD1和 anti-hLAG3联用组(n=7),使用相应药物进行治疗。每周给药2次,共给药6次。数据以Mean ± SEM形式呈现。

结果显示:anti-mPD1单药组、anti-hLAG3单用组对肿瘤生长抑制作用小(anti-mPD1单药组TGI=19.13% , anti-hLAG3单药组TGI=21.13%),anti-mPD1和 anti-hLAG3联用组对肿瘤生长抑制作用大(TGI=40.69%)(左图),小鼠体重变化趋势一致(右图)。

结果证明:LAG3人源化小鼠是评估anti-hLAG3抗体体内药效的有力工具。


2. C57BL/6-hPD1/hLAG3:Anti-hPD1及Anti-hLAG3抗肿瘤药效

在B6-hPD1/hLAG3小鼠皮下接种MC38肿瘤细胞系后测试抗人PD1和LAG3抗体肿瘤抑制药效。

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左图:小鼠肿瘤生长曲线;右图:小鼠体重变化曲线

基于B6-hPD1/hLAG3小鼠皮下接种MC38模型的体内药效实验。将结肠癌细胞MC38培养至对数生长期后接种至6-8周龄的B6-hPD1/hLAG3(PD1和LAG3同时人源化小鼠)皮下,待肿瘤生长至平均体积约80-120mm3时随机分为Vehicle组(n=7)、 anti-hPD1单药组(n=6)、anti-hPD1和 anti-hLAG3联用组(n=6),使用相应药物进行治疗。每周给药2次,共给药4次。数据以Mean ±SEM形式呈现。

结果显示:anti-hPD1单药组对肿瘤生长抑制作用小(TGI=25.64%),anti-hPD1和 anti-hLAG3联用组对肿瘤生长抑制作用大(TGI=89.29%)(左图),小鼠体重变化趋势一致(右图)。

结果证明:PD1/LAG3双人源化小鼠是评估anti-hPD1和anti-hLAG3抗体体内联合药效的有力工具。


参考文献

[1] Sierro, Sophie, Pedro Romero, and Daniel E. Speiser. "The CD4-like molecule LAG-3, biology and therapeutic applications." Expert opinion on therapeutic targets 15.1 (2011): 91-101.

[2] Goldberg, Monica V., and Charles G. Drake. "LAG-3 in cancer immunotherapy." Cancer Immunology and Immunotherapy. Springer, Berlin, Heidelberg, 2010.269-278.

[3] Triebel, Frederic, et al. "LAG-3, a novel lymphocyte activation gene closely related to CD4." Journal of Experimental Medicine 171.5 (1990): 1393-1405.

[4] Huard, Bertrand, et al. "CD4/major histocompatibility complex class II interaction analyzed with CD4‐and lymphocyte activation gene‐3 (LAG‐3)‐Ig fusion proteins." European journal of immunology 25.9 (1995): 2718-2721.