技术资源

  • 全身性敲除与条件性敲除有什么区别?

    常规敲除(Traditional KO或Conventional KO)是通过同源重组或CRISPR-Cas9技术,将基因组上的目的基因进行移码突变或片段删除,使基因在全身组织和细胞中的功能丧失。

    一些具有重要功能的基因进行全身性敲除后可能会无法繁育得到纯合子,可以采用条件性敲除即CKO的方法来制作。

    条件型敲除(Conditional KO)是在基因关键外显子的两侧各引入一个loxP位点,构建flox小鼠模型,该模型通过与全身或组织特异性表达Cre重组酶的工具鼠交配后,在Cre酶表达的组织和细胞中可实现基因的特异性敲除;也可与诱导型的CreER小鼠模型交配,通过Tamoxifen诱导,在生长发育的特定时期实现基因的敲除。



  • F0代或嵌合鼠为什么需要与背景鼠回交?

    F0代或嵌合体小鼠中的修饰基因非稳定可遗传,可能生殖系细胞并未被进行编辑因而无法遗传获得阳性后代;可能在一只鼠身上存在多种不同的编辑类型,导致传代后的小鼠基因型不正确或存在多种不同的基因型;每只F0代鼠的情况均不同。为了得到稳定可遗传的基因编辑小鼠,需要将F0代或嵌合体与野生型背景小鼠回交,得到阳性F1代杂合子。转基因品系由于存在多位点多拷贝随机插入的情况,F0代founder鼠可能需要回交多代才能实现稳定。

  • 各项模型中的质控方案是什么样的?

    在各类项目的载体构建的阶段,每一步都需经过PCRà酶切à测序的过程,确保载体的正确性。

    在小鼠阶段,采用对5-7天的小鼠进行剪尾鉴定,同样是经过PCR测序的检测过程, 保证KO/CKO/KI模型正确中靶,并且中靶序列正确。KI类模型还有严格的拷贝数检测,确保除了正确中靶的序列外,无额外的随机插入片段。


  • 模型定制服务最后交付给客户的内容?

    我们最终会为客户提供至少3只经过鉴定为阳性的杂合子小鼠(转基因为至少3只founder小鼠)。在项目完成得到足够数量的杂合子小鼠后,我们会将该项目的项目完成报告、小鼠使用手册、鉴定体系说明一并发送给客户。

  • 模型定制服务的交付标准

    交付基因型正确的SPF级小鼠。

  • 模型定制类业务具体能提供哪些技术服务?

    我们能够提供普通转基因(TG)、BAC转基因(BAC-TG)、基于CRISPR-Cas9技术的KO、CKO、敲入、点突变等小鼠模型定制。可至https://www.gempharmatech.com/technology/customization.html了解详情和在线填写意向单。



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