肿瘤免疫相关
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NCG小鼠随着年龄的增长会有免疫恢复的情况吗?
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NCG是使用基因编辑技术敲除了NOD/ShiltJGpt小鼠的Prkdc(Protein kinase, DNA activated, catalyticpolypeptide)及 Il2rg(Common gamma chain receptor)基因而获得的重度免疫缺陷品系。Prkdc基因功能缺失造成T细胞和B细胞不能发育成熟。IL2RG是多种白细胞介素细胞因子受体的共同亚基,IL2RG失活则导致多种不同细胞因子信号通路缺失,造成NK细胞缺陷。因此,NCG是迄今为止免疫系统缺陷最为彻底的小鼠模型之一,缺乏成熟的T细胞、B细胞和NK细胞,暂未出现随着年龄的增长有免疫细胞渗漏的情况。
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小鼠辐照注意事项
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小鼠全身性辐照,尤其是X-RAY辐照,可能会出现辐照诱导的胃肠道综合征(Radiation-induced gastrointestinal syndrom),主要表现:小鼠肠壁变薄,胃肠道内的微生物侵袭引起胃肠道弥散性出血。另外,也可以考虑辐照前>7d予以抗生素处理(集萃药康HSC重建小鼠生产目前未使用),辐照后密切关注动物的饮食、饮水及体重情况,必要时给予碎饲料或营养胶辅助进食,补充营养。
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造NCG小鼠GvHD模型,接种量是多少,多久发病?
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不同donor差异比较大,需要进行广泛的donor筛选。一般接种剂量1E7-2E7,发病时间7-21d都有可能,主要看donor的差异。这个筛选过程成本比较高,我司有筛选好的donor,客户可以考虑直接在我司开展药效实验。
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客户提供的细胞在项目中没有成功成瘤怎么办?
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这种情况是会出现的,由于细胞特性的不同、在动物体内生长环境和培养皿环境的不同,会带来细胞不同生长趋势的结果,也和细胞接种量、动物选择性有关。所以,建议对于新改造的或新购买的细胞,不要直接开展大规模的药效,而是先做小规模的成瘤性测试,摸索成瘤条件,避免造成不必要的损失。
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客户能提供细胞进行成瘤或药效实验么?
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可以的。客户需要提供支原体检测报告,我司会做支原体检测复核。因支原体是SPF动物房禁止带入的微生物,也会对成瘤性测试或药效实验带来不准确的实验结果。客户可提供该细胞的小样,支原体检测报告为阴性的时候,方可启动正式实验,正式实验细胞注射后还会留取小样再进行复核。
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为什么huHSC免疫重建需要辐照,而PBMC不需要?
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亚致死剂量的清髓(清除的不全是干细胞),目的是为了提高huHSC移植后小鼠体内的重建水平。PBMC为外周血单个核细胞,该方法可以在较短时间内实现快速的免疫系统重建,小鼠不需要提前清髓处理。
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影响CDX荷瘤效果的因素
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小鼠异种移植肿瘤模型 CDX 与 PDX
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相同点:肿瘤组织或者细胞来源于癌症病人。
不同点:PDX是病人的肿瘤组织瘤块,保留了肿瘤的微环境和异质性,个体间差异较大,建模与临床更为接近,但PDX生长周期较长,均一性较差。药康大部分PDX样本为冻存状态,药效周期为:复苏接种小鼠生长至可传代(2-4个月)+传代后生长给药评价药效(2-4个月)共需约4-8个月时间,不同PDX肿瘤周期差异较大。
CDX是经过体外建立的稳定细胞株,细胞荷瘤均一性较好,个体间的一致性较高,但CDX生长较快,一般细胞扩大培养(10~15天)+接种小鼠给药评价(1.5~2.5个月),周期较短。
应用差异:CDX可用于药物的初期筛选,有前人研究结果,细胞背景比较清晰。PDX对于个体而言,可用于精准医疗药效预测,筛选更为合适的药物;对于药企而言,可用于药物受众的筛选,选择更加准确的适应症。
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小鼠肿瘤移植模型的分类
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根据供体和受体的来源不同,分为两类。
1)异种移植模型(Xenograft transplantation model),选用人源的肿瘤,接种到免疫缺陷小鼠皮下,一般用于化疗药物、ADC药物、细胞治疗等筛选,若免疫缺陷小鼠进行人免疫系统重建,也可用于免疫治疗类药物筛选;
2)同种移植模型(Allograft transplantation model),选用鼠源的肿瘤,接种到免疫正常的同背景小鼠皮下,常用于大分子抗体、ADC药物、化疗药物及靶向药物评价。
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